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Citofluorometría, herramienta fundamental para la caracterización de células

Cytofluorometry, a fundamental tool for cell characterizaction

La doctora Gloria Soldevila, investigadora del Departamento de Inmunología del Instituto de Investigaciones Biomédicas (IIB), presentó la Unidad de Citofluorometría de esta dependencia, cuyo objetivo es poner a disposición de investigadores, estudiantes de posgrado y técnicos académicos herramientas de calidad para el análisis celular cualitativo y cuantitativo, así como para la separación celular automatizada.

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Gloria Soldevila

En la conferencia “Citofluorometría: una herramienta con múltiples aplicaciones”, Soldevila dio un panorama general de los fundamentos de la citofluorometría y sus aplicaciones para el análisis de muestras celulares.

Indicó que se trata de una tecnología que permite la medición simultánea de múltiples características físicas de células individuales por medio de un sistema de alta velocidad.

La Unidad cuenta con tres citofluorometros de flujo que emplean la interacción de la luz que incide en células o partículas con el propósito de proporcionar información sobre el tamaño; complejidad, y fluorescencia de estas.

Un citómetro de flujo consta de tres sistemas: el fluídico, el óptico y el electrónico. En el primero, las células son conducidas por un flujo laminar muy delgado.

El sistema óptico consta de lásers que iluminan las partículas suspendidas en el fluído y filtros ópticos que dirigen las señales luminosas a los detectores apropiados, las cuales son convertidas por el sistema electrónico en señales que pueden ser procesadas por  computadoras.

El inicio de la captura de la muestra ocurre cuando las células en suspensión circulan en fila a través de una zona iluminada por un láser. En este punto las células dispersan la luz y emiten fluorescencia que es recolectada y trasformada en valores digitales almacenados en una computadora.

Al incidir el láser sobre la célula ocurren dos fenómenos que son la difracción de la luz que permite apreciar, a través de la máquina, el tamaño de la célula y la reflexión de la luz que da información sobre la complejidad interna de la muestra.

En el auditorio “Francisco Alonso de Florida” la doctora Soldevila, responsable de la Unidad de Citoflurometría junto con el Químico Farmacobiólogo Carlos Castellanos, indicó que la ventaja que ofrecen estos instrumentos es la posibilidad de analizar y separar poblaciones  celulares incluso de bacterias y parásitos.

Indicó que cualquier citómetro es capaz de detectar en la muestra celular dos parámetros: su tamaño y su granularidad, sin introducir en ella fluorescencia o marcarla con fluorocromo.Esto significa que la luz dispersada en dirección frontal y perpendicular al láser da una visión proporcional del tamaño de la célula y se denomina forward scattered light (FSC), cuanto más FSC existe más grande es la célula. En tanto que la luz reflejada y dispersa en un ángulo de 90 grados se llama side scattered light (SSC) y es proporcional a la complejidad interna de la muestra celular.

Aclaró que fluorescencia es la luz emitida cuando una longitud de onda de alta energía influye sobre un fluorocromo, es decir, la luz o láser que incide en el fluorocromo hace que este emita una longitud de onda y genere florescencia verde, azul o roja.

Los fluorocromos como isotiocianato de fluoresceína (FITC), ficoeritrina (PE), aloficocianina(APC) y yoduro de propidio (PI), entre otros, son moléculas químicas que absorben luz a una determinada longitud de onda.

Soldevila indicó que la célula al ser marcada con fluorocromo emite fluorescencia de diferentes longitudes de onda que son captadas por los fotodetectores del instrumento, cada uno interpreta la señal en FL1 si es verde, FL 2 si se es naranja, FL3 si es roja, FL4 si se trata de azul.

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Gloria Soldevila y Carlos Castellanos

La Unidad de Citofluorometría ubicada en la sede del Instituto de Investigaciones Biomédicas de Circuito Escolar, se puso en marcha en 2004, con el financiamiento del Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACYT), así como por la sinergia entre el Instituto de Investigaciones Biomédicas y la empresa Becton & Dickinson. Actualmente esta Unidad da servicio a más de 50 grupos de investigación y  cuenta con un reglamento para el uso de los equipos.

La doctora Soldevila describió las características de los equipos  FACScan, FACSaria y FACScalibur que integran la Unidad de Citofluorometría. El primero, que el más antiguo, posee sólo un láser y puede analizar tres colores y siete parámetros.

En tanto que el FACSaria ostenta dos lásers, puede analizar siete colores y nueve parámetros diferentes, es un instrumento muy veloz, ofrece 70 mil eventos por segundo de forma simultánea, posee las capacidades de sorting celular automatizado basado en varios parámetros y de separar hasta cuatro poblaciones simultáneas. Cuenta con control de temperatura porque permite el manejo de células frías o calientes.

El FACScalibur tiene dos lásers que permiten visualizar cuatro colores al mismo tiempo, además del parámetro de tamaño y granularidad. Es fácil de manejar, pero no es tan rápido como el FACSaria. Se pueden manejar dos mil eventos por segundo. Posee un dispositivo para hacer separación celular, pero, aclaró Soldevila, es una separación primitiva comparada con el FACSaria porque requiere de mucho tiempo y no permite dividir poblaciones simultáneamente.

La Unidad de Citoflourometría se localiza en el primer piso del  Edificio B, de la antigua sede del Instituto de Investigaciones Biomédicas. Ofrece sus servicios tanto a grupos de investigación de este Instituto como a grupos externos. Para mayor información puede contactar a Gloria Soldevila al teléfono 5622-3159, y a Carlos Castellanos al  5622-8911, o bien puede ingresar a la página electrónica del Instituto www.biomedicas.unam.mx/Servicios.htm Pável Álvarez  

Artículo publicado en Gaceta Biomédicas, Marzo del 2008.

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