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Desarrollo y validación de métodos analíticos para el registro de medicamentos

Desarrollo y validación de métodos analíticos para el registro de medicamentos

Olguín-Pérez, L., Paniagua-Solís, J.

Los estudios clínicos (EC) constituyen una parte medular para el registro de un fármaco ante las autoridades sanitarias de la mayoría de los países. Los EC están constituidos por fases clínicas en humanos con objetivos y tamaño de población específicos para cada una, en algunos casos se pueden requerir protocolos preclínicos en animales de laboratorio; en ambos casos las muestras se analizan con métodos in vivo e in vitro. Uno de los métodos eficientes y consistentemente utilizados para la cuantificación de proteínas es el ELISA (del inglés Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assays), por su alta sensibilidad y reproducibilidad.

Fig. 1 Parámetros a evaluar en la validación de métodos analíticos. (Según ICH, Q2(R1).

Un ejemplo de la implementación de estos métodos como herramienta para analizar muestras de EC, son los ensayos para cuantificar dos tipos de antivenenos basados en fragmentos de inmunoglobulinas, F(ab’)2 y Fab, en muestras de plasma humano los cuales fueron optimizados y validados por Instituto Bioclon ya que no se cuenta con un kit comercial para ello. Se utilizaron anticuerpos de conejo inmunopurificados anti F(ab’)2 de caballo o anti Fab de borrego, adsorbidos en placas de 96 pozos para capturar los antígenos respectivos en plasma humano. Los antivenenos capturados fueron detectados utilizando peroxidasa conjugada a anticuerpos anti F(ab’)2 de caballo o anti IgG de borrego, respectivamente. Se obtuvo recobro del analito de más del 80 por ciento en las muestras de plasma humano. Las curvas estándar fueron consistentes con un coeficiente de correlación mayor a 0.985 en un intervalo de 2.93-3,000 y 1.46-1,500 ng/mL para F(ab’)2 y Fab, respectivamente. Se establecieron los Límites Bajos de Cuantificación (LBC), en 40 ng/mL para F(ab’)2 y 30 ng/ml para Fab. El coeficiente de variación de la precisión intermedia para la cuantificación de las muestras control adicionadas del analito (40, 80 y 240 ng/mL para F(ab’)2 y 30, 72 y 172.8 ng/ml Fab) fue de 10 por ciento respecto de los valores establecidos. No se encontró interferencia por la presencia de anticoagulantes y diversos medicamentos.

Asimismo, se evaluó la estabilidad en congelación de muestras adicionadas con Fab y F(ab’)2 , demostrándose estabilidad hasta por tres ciclos de congelación-descongelación, así como estabilidad a largo plazo de 9 y 12 meses, respectivamente.

La validación de métodos analíticos es una herramienta para demostrar, de manera estadística, que éstos son reproducibles, efectivos, precisos, lineales y selectivos. Ambos están siendo utilizados para analizar la cantidad de estos antivenenos en muestras humanas y de animales de laboratorio en estudios clínicos de diferentes fases tanto nacionales como en EEUU para registro ante la Food and Drug Administration (FDA).Las validaciones mencionadas fueron implementadas siguiendo los lineamientos de normas internacionales de ICH sección Q2 (R1).


  Fuente:

Protocolo de Validación de Método Analítico para la Cuantificación de Fab y F(ab’)2 por Inmunoensayo tipo ELISA en Muestras de Plasma Humano.

Olguín-Pérez, L., Chávez-Méndez, A., Olvera-Rodríguez, F., Buelna-Romero Alma, García- Ubbelohde, W., Boyer, L., Alcántara-Pineda, A., Alagón, A.   *Paniagua-Solís, J..

Artículo publicado en Gaceta Biomédicas, abril del 2008.

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